2、注射用天花粉對(duì)假孕兔子宮孕酮受體(P-R)和雌醇受體(E-R)的影響
取健康成熟雌兔,體重2.5kg以上,靜脈注射人絨毛膜促性腺激素(HCG)500單位以產(chǎn)生假孕,注射當(dāng)天作為假孕1日,然后將動(dòng)物分成2組,每組7-8只。
于假孕第6日、7日給天花粉組每天肌肉注射天花粉注射劑,臨用前用生理鹽水溶解到5mg/2ml)2mg/kgl次。
對(duì)照組每天注射生理鹽水0.8ml/kgl次。于第8日由耳緣靜脈取血2ml于含肝素(約0.5mg)的離心管中,離心得血漿供測(cè)孕酮用。
然后將兔放血處死,立即剖腹取下子宮,剪取一段子宮放入營(yíng)養(yǎng)液中,供進(jìn)行離體子宮實(shí)驗(yàn),其余部分用冰生理鹽水洗3次,剪碎后與緩沖液按1:3(W/V)比例混合,置于勻漿管中,在低溫條件下制成勻漿,供受體測(cè)定用。
P-R、E-R的測(cè)定和KA值的求得采用放射受體測(cè)定法,參考Rayard等和Andersan等的方法結(jié)合本實(shí)驗(yàn)條件略加修改。
按Loury法測(cè)定子宮胞質(zhì)液的蛋白含量,二苯胺法測(cè)定子宮細(xì)胞核的DNA含量,胞質(zhì)液受體fmol/mg蛋白表示,核受體是以fmol/mgDNA表示。
作Scatchardplot求得孕酮和P-R及雌二醇和E-R的KA值。
血漿孕酮濃度測(cè)定按horneycroft報(bào)告的方法,以11a羥孕酮琥珀酸酐牛血清蛋白為抗原,對(duì)家兔進(jìn)行免疫,抗血清效價(jià)1:2000以上。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,假孕第八天子宮胞質(zhì)液和細(xì)胞核的P-R含量經(jīng)t測(cè)驗(yàn),兩組間有顯著差異,說(shuō)明注射天花粉后,能使假孕兔子宮的P-R含量降低。
作Scatchardplot求得孕酮和胞質(zhì)液P-R的KA值:對(duì)照組KA=1.08x10(9)M-1,天花粉組KA=0.28x10(9)M,說(shuō)明天花粉使孕酮和P-R的親和力明顯下降。
假孕第八天子宮胞質(zhì)液和細(xì)胞核的E- R含量,經(jīng)t測(cè)驗(yàn),二組間無(wú)明顯差異,雌二醇和E-R的KA值:對(duì)照值KA=1.01x10(9)M-1,天花粉組KA=1.1×10(9)M-1,兩組間也無(wú)顯著差異,表明天花粉組對(duì)假孕兔子宮E-R無(wú)明顯影響。
假孕兔第8日血漿孕酮濃度對(duì)照組與天花粉組之間無(wú)明顯差異。
一般認(rèn)為子宮活動(dòng)受激素調(diào)節(jié),Csapo等報(bào)道妊娠子宮所以處于靜息狀態(tài),是與體內(nèi)血漿孕酮濃度較高有關(guān),妊娠兔子宮活動(dòng)可被孕酮所阻抑,并使之對(duì)催產(chǎn)素和前列腺素均不敏感。
束懷德等。曾報(bào)導(dǎo)天花粉能使妊娠兔子宮自發(fā)收縮活動(dòng)增加,認(rèn)為這種作用可能與天花粉損傷胚胎,使體內(nèi)孕酮水平下降及促使蛻膜釋放前列腺素有關(guān)。
實(shí)驗(yàn)采用假孕兔測(cè)得第8日的血漿孕酮濃度,與Balduin等,報(bào)道的同期孕兔血漿孕酮濃度相近,注射天花粉后孕酮濃度并不下降,與對(duì)照血相似,但能使子宮自發(fā)收縮明顯增加,說(shuō)明天花粉對(duì)胚胎和蛻膜的損傷以及繼發(fā)的孕酮下降,可能不是天花粉引起子宮自發(fā)收縮增加的主要機(jī)理。
Hai等報(bào)道妊娠大鼠在臨床前子宮細(xì)胞核中P-R含量下降,認(rèn)為臨床子宮活動(dòng)增加是由于子宮內(nèi)P-R含量減少所致。
實(shí)驗(yàn)曾觀察到15-甲-PGF2a對(duì)假孕兔有溶黃體作用,血漿孕酮濃度于注射15-甲-PGF2a后24小時(shí)下降到極低水平,此時(shí)子宮P-R受體含量增加,子宮并無(wú)明顯自發(fā)收縮仍處于靜息狀態(tài)。
天花粉不改變假孕兔血漿孕酮濃度,但使子宮P-R含量降低并使孕酮與P-R的親和力下降,而同時(shí)子宮自發(fā)收縮活動(dòng)明顯增加。
因此設(shè)想,天花粉使子宮P-R含量減少和使孕酮與P-R的親和力降低,可能是天花粉使子宮自發(fā)收縮活動(dòng)增加的重要機(jī)理,子宮P-R可能與子宮活動(dòng)調(diào)節(jié)有關(guān)。